WB转膜大全
湿转？半干转？选哪种
在Western Blot（WB）实验中，转膜是将电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到固相载体（如NC膜或聚偏二氟乙烯膜，PVDF）上的重要步骤。
这篇将总结湿转与半干转，为你解答相关疑问：
什么是湿转？什么是半干转？
各自的优缺点有哪些？
什么情况下适合使用哪种？
湿转法是将转膜三明治（海绵垫-滤纸-膜-凝胶-滤纸-海绵垫）完全浸泡在转膜缓冲液中，通过电场作用，带负电荷的蛋白向阳极移动，结合在膜上，不再继续移动。
✦ 优势
✦
缓冲条件充足
由于整个体系浸泡在转膜缓冲液中，提供了充足的缓冲能力，有利于蛋白质的转移。
转膜效果稳定
由于缓冲液的作用，转膜过程较为稳定，能够得到较为均一的转膜效果。
适用范围广
适用于大小分子量蛋白质的转移，尤其是高分子量蛋白。
✦ 缺点
✦
转膜时间较长
转膜时间相对较长，一般1h起步。因为穿过膜和胶的有效电流较少，大多数电流会在缓冲液间侧漏。
消耗缓冲液多
需要大量的转膜缓冲液，同时吸入过量甲醇。
需要控制温度
需要额外的冷却单元来控制温度，操作相对复杂。
✦ 常用实验条件
✦
缓冲液
常用的有Towbin转移缓冲液（25 mM Tris、192 mM 甘氨酸、20% 甲醇 (v/v)，pH 8.3），也可根据实验需求调整缓冲液成分。
电压/电流
200V 300mA
时间
根据蛋白质分子量大小调整。
蛋白分子量 | 转膜时间 |
小于30kDa | 30min |
30-70kDa | 60min |
70-140kDa | 90-120min |
对于分子量大于 100 kDa 的蛋白，建议在转膜缓冲液中添加终浓度为 0.1% 的 SDS。
半干法是利用滤纸吸收缓冲液，将膜、胶和滤纸组成的转膜三明治放在正负极之间，通过电场作用进行转膜。
与湿转类似，膜靠近正极、凝胶靠近负极，这一点很重要。
✦ 优势
✦
转膜速度快
由于高场强、高电流的作用，转膜速度较快，通常在半小时以内即可完成。
消耗缓冲液少
仅需少量转膜缓冲液，因此不需要回收，每次用新的转膜缓冲液效果好，且降低了实验成本。
✦ 缺点
✦
大分子不适用
不适合长时间转膜，对于大分子量蛋白可能存在转膜效果不佳的问题。
✦ 常用实验条件
✦
缓冲液
Towbin转移缓冲液（48mM Tris、39mM 甘氨酸、0.04%SDS和20% 甲醇）或根据需求调整。
电压/电流
20-25V 1-1.5mA
时间
5-30min
Tips
建议使用0.22μm的NC膜，避免转过。